如何使用ELISA試劑盒進(jìn)行比色？

　　ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)水平。用純化的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)，再與HRP標(biāo)記的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成較終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)濃度。
 

　　ELISA試劑盒的比色實(shí)驗(yàn)：
 

　　比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體，然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗(yàn)，需先將板置于標(biāo)準(zhǔn)96孔的座架中，才可進(jìn)行比色。較好在加底物液顯色前，先將軟板邊緣剪凈，這樣，此板就可*平妥坐入座架中。比色時(shí)應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn)，測(cè)讀底物孔(未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔)和空白孔(以生理鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過程的孔)，以記錄本次試驗(yàn)的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點(diǎn)，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度，然后進(jìn)行計(jì)算。
 

　　比色結(jié)果的表達(dá)以往通用光密度(oplical density，OD)，現(xiàn)按規(guī)定用吸光度(absorbence，A)，兩者含義相同。通常的表示方法是，將吸收波長(zhǎng)寫于A字母的右下角，如OPD的吸收波長(zhǎng)為492nm，表示方法為"A492nm"或"OD492nm"。